Plasmide CRISPR d'Activation (h) ATF4: sc-400155-ACT

Le facteur de transcription activant 4 (ATF4) est un facteur de transcription bZIP qui intègre les signaux de stress cellulaires afin de réguler le métabolisme des acides aminés, l’homéostasie rédox, l’autophagie et l’apoptose. Il constitue un effecteur central de la réponse intégrée au stress, en aval de la phosphorylation d’eIF2α, et coopère avec la signalisation PERK lors du stress du réticulum endoplasmique pour remodeler les programmes transcriptionnels. ATF4 intervient également au croisement des réponses au stress mitochondrial et des voies de détection des nutriments, afin de coordonner une expression génique adaptative en conditions d’hypoxie ou de stress protéotoxique. Une activité dérégulée d’ATF4 a été associée à la survie des cellules tumorales en situation de stress métabolique, à des pathologies neurodégénératives liées à une signalisation de stress chronique, ainsi qu’à la biologie osseuse via la régulation des programmes de différenciation des ostéoblastes.

ATF4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ATF4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ATF4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ATF4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ATF4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ATF4. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ATF4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ATF4 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ATF4 dans les cellules tumorales présentant une expression de ATF4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.