ATF3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-416577-ACT

ATF3 (fator de transcrição ativador 3) é um fator de transcrição bZIP induzível por estresse que integra diversos estímulos, como estresse do RE (retículo endoplasmático), dano ao DNA, estresse oxidativo e sinalização inflamatória, em programas transcricionais dependentes do contexto. Ele modula redes gênicas relacionadas ao AP-1 e pode atuar como represssor ou ativador transcricional, dependendo dos parceiros de ligação e do estado da cromatina, moldando desfechos como controle do ciclo celular, apoptose e adaptação metabólica. A atividade do ATF3 intersecciona vias de MAPK, NF-κB e da resposta a proteínas mal dobradas, conectando respostas agudas ao estresse a mudanças de longo prazo na diferenciação e na regulação imune. A expressão desregulada de ATF3 tem sido associada a fenótipos inflamatórios alterados e à sinalização de estresse associada a tumores, tornando-o um nó útil para estudos mecanísticos da plasticidade do estado celular.

ATF3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ATF3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ATF3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ATF3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ATF3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ATF3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ATF3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ATF3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ATF3 em células tumorais com expressão de ATF3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.