Plasmide Double Nickase (h) ATF-6α: sc-400259-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) ATF-6α correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide ATF-6α Double Nickase (h) et le plasmide ATF-6α Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ATF6. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: ATF-6α Antibody (F-7): sc-166659
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) ATF-6α | sc-400259-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) ATF-6α | sc-400259-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le facteur de transcription 6 alpha (ATF6α) est un facteur de transcription ancré à la membrane du réticulum endoplasmique (RE) qui agit comme un capteur et un effecteur central de la réponse aux protéines mal repliées (UPR). En situation de stress du RE, ATF6α est acheminé vers l’appareil de Golgi, où une protéolyse intramembranaire régulée libère un fragment N‑terminal qui se transloque dans le noyau et induit l’expression de chaperonnes et de gènes de dégradation associée au RE (ERAD), coordonnant la protéostasie et l’homéostasie de la voie sécrétoire. La signalisation d’ATF6α recoupe les voies PERK et IRE1, modulant le contrôle de la traduction, l’équilibre redox et les réponses inflammatoires au cours de l’adaptation au stress. Une activité dérégulée de l’axe ATF6 a été impliquée dans des affections caractérisées par un stress protéotoxique chronique, notamment les dysfonctionnements métaboliques, les maladies neurodégénératives et l’adaptation des cancers à l’hypoxie et à la limitation en nutriments.
ATF-6α Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ATF6 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ATF6. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ATF6. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ATF6.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.