Plasmide CRISPR d'Activation (h) Ataxin-10: sc-406001-ACT

ATXN10 code l’ataxine-10, une protéine cytoplasmique impliquée dans la coordination de l’organisation du cytosquelette et de la dynamique membranaire, avec des rôles rapportés dans l’homéostasie neuronale et les réponses au stress cellulaire. L’ataxine-10 a été associée à des processus de signalisation qui influencent la morphologie et la survie cellulaires, notamment des voies croisant le remodelage de l’actine et le trafic intracellulaire. La dysrégulation d’ATXN10 est associée à des phénotypes neurodégénératifs, et l’expansion de répétitions au locus ATXN10 est liée à l’ataxie spinocérébelleuse de type 10, ce qui souligne son intérêt pour l’étude des mécanismes de vulnérabilité neuronale. Par conséquent, ATXN10 est fréquemment étudié dans des modèles de neurobiologie, de signalisation cellulaire et de relations génotype–phénotype.

Ataxin-10 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ATXN10 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Ataxin-10 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ATXN10 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ATXN10, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Ataxin-10. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ATXN10 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Ataxin-10 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Ataxin-10 dans les cellules tumorales présentant une expression de ATXN10 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.