Asporin Double Nickase Plasmid (m): sc-426152-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Asporin Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Asporin Double-Nickase-Plasmid (m) und Asporin Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Aspn abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Asporin Double Nickase Plasmid (m) | sc-426152-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Asporin Double Nickase Plasmid (m2) | sc-426152-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Aspn kodiert Asporin, ein kleines leucinreiches Proteoglykan der extrazellulären Matrix, das zur Kollagenfibrillogenese und zur Regulation der Matrixorganisation in muskuloskelettalen Geweben beiträgt. Maus-Asporin kann die Signalübertragung von Wachstumsfaktoren modulieren, einschließlich Interaktionen, die Signalwege der TGF-β-Familie beeinflussen, und wirkt dadurch auf Chondrogenese, Osteogenese und die Homöostase von Faserknorpel. Eine veränderte ASPN-Expression oder -Funktion wurde mit fehlregulierter Remodellierung der extrazellulären Matrix und inflammatorischer Signalgebung in Verbindung gebracht, was es für Studien zu Osteoarthrose, Degeneration der Bandscheibe, Sehnen-/Bandpathologien und fibroseassoziierten Matrixveränderungen relevant macht. In-vitro- und In-vivo-Modelle nutzen häufig Aspn-Interventionen, um zu untersuchen, wie stromale Matrixsignale Zelladhäsion, Mechanotransduktion und Differenzierungsprogramme prägen.
Asporin Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Aspn-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Aspn abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Aspn-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Aspn-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.