Asparagine synthetase Lentiviral Activation Particles (h): sc-402240-LAC

ASNS kodiert die humane Asparaginsynthetase, ein zytosolisches Enzym, das die ATP-abhängige Umwandlung von Aspartat und Glutamin zu Asparagin und Glutamat katalysiert und damit den Stickstoffstoffwechsel mit der Aminosäurehomöostase verknüpft. Durch die Regulation der intrazellulären Verfügbarkeit von Asparagin beeinflusst ASNS die Proteinsynthese, das Redoxgleichgewicht und adaptive Antworten auf Nährstoffmangel, mit Bezügen zur integrierten Stressantwort sowie zu Signalwegen der Aminosäure-Sensorik. Die ASNS-Expression wird unter metabolischem Stress häufig moduliert und kann die zelluläre Abhängigkeit von extrazellulären Aminosäuren mitprägen, was sie für Studien zur metabolischen Reprogrammierung und Stresstoleranz relevant macht. Veränderte ASNS-Aktivität und -Regulation wurden mit neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen sowie mit der Tumorbiologie in Kontexten in Verbindung gebracht, in denen die Nährstoffverfügbarkeit das Wachstum begrenzt.

Asparagine synthetase Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente ASNS-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

Asparagine synthetase Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der ASNS-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen Asparagine synthetase-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen ASNS-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.