ASIC1 Double Nickase Plasmid (h): sc-401452-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ASIC1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ASIC1 Double-Nickase-Plasmid (h) und ASIC1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ASIC1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ASIC1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-401452-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ASIC1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401452-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Humanes ASIC1 (acid-sensing ion channel 1, ASIC1) kodiert einen protonengesteuerten, natriumpermeablen Ionenkanal der DEG/ENaC-Familie, der eine extrazelluläre Ansäuerung mit einer schnellen Membrandepolarisation koppelt. Die ASIC1-Aktivität prägt die neuronale Erregbarkeit und die synaptische Signalübertragung und kann über die sekundäre Aktivierung spannungsabhängiger Kanäle sowie nachgeschaltete Kinase-Signalwege die intrazelluläre Kalziumdynamik beeinflussen. Der Kanal ist an pH-Sensorprozessen beteiligt, die mit ischämieassoziierter Azidose, nozizeptiver Transmission und neuroinflammatorischen Mikroumgebungen verknüpft sind. Eine dysregulierte ASIC1-Funktion oder -Expression wurde unter anderem im Kontext von Schlaganfallanfälligkeit, chronischen Schmerzzuständen und angstbezogenen Verhaltensweisen untersucht, was seine Eignung als mechanistisches Ziel in der Neurobiologie und der Ionenkanalforschung unterstreicht.
ASIC1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ASIC1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ASIC1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ASIC1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ASIC1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.