ASIC1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401452

Übersicht

ASIC1 (acid-sensing ion channel subunit 1) kodiert einen protonengesteuerten, spannungsunempfindlichen Kationenkanal der DEG/ENaC-Familie, der sich als Reaktion auf eine extrazelluläre Azidifizierung öffnet, um den Na⁺-Einstrom zu ermöglichen und die Membranerregbarkeit zu modulieren. ASIC1 trägt zur synaptischen Transmission, zur neuronalen Plastizität und zu pH-abhängiger Signalübertragung bei und ist in erregbaren Zellen mit Ca²⁺-abhängigen Signalwegen sowie aktivitätsregulierten Genprogrammen verknüpft. Eine veränderte ASIC1-Aktivität wurde mit Neuroinflammation und exzitotoxischen Stressantworten in ischämischen und neurodegenerativen Kontexten in Verbindung gebracht und wird zudem im Zusammenhang mit schmerzbezogener sensorischer Verarbeitung untersucht. Diese Eigenschaften machen das humane ASIC1 zu einem nützlichen Ziel, um Säuresensormechanismen, Ionenhomöostase und reizgekoppelte Signalnetzwerke zu analysieren.

Das ASIC1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des ASIC1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des ASIC1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von ASIC1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ASIC1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von ASIC1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ASIC1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf ASIC1-Exone abzielen, die für die ASIC1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere ASIC1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ASIC1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom ASIC1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des ASIC1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ASIC1 HDR-Plasmid (h) und ASIC1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von ASIC1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten ASIC1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.