ASCT2 Double Nickase Plasmid (m): sc-422987-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ASCT2 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ASCT2 Double-Nickase-Plasmid (m) und ASCT2 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Slc1a5 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
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| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ASCT2 Double Nickase Plasmid (m) | sc-422987-NIC | 20 µg | $410.00 |
Das murine Gen **Slc1a5** kodiert den Transporter für neutrale Aminosäuren **ASCT2 (SLC1A5)**, einen natriumabhängigen Carrier, der die zelluläre Aufnahme und den Austausch von Glutamin und anderen kleinen neutralen Aminosäuren vermittelt. ASCT2 unterstützt die Aminosäurehomöostase und deckt biosynthetische sowie bioenergetische Anforderungen, indem es die Glutaminverfügbarkeit mit Signalwegen wie der **mTORC1-Signalisierung**, der **Redoxkontrolle** über die **Glutathionsynthese** und der **mitochondrialen Anaplerose** verknüpft. Im Immunsystem und in schnell proliferierenden Zelltypen beeinflusst die ASCT2-Aktivität Aktivierungsprogramme und metabolische Umprogrammierungen, die Nährstofftransport mit Wachstums- und Stressantworten koppeln. Eine dysregulierte Expression oder Funktion von SLC1A5 wird mit veränderter Nährstoffabhängigkeit und metabolischen Phänotypen in Modellen der Krebsbiologie, Entzündung und Gewebeumbau in Verbindung gebracht.
ASCT2 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Slc1a5-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Slc1a5 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Slc1a5-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Slc1a5-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.