Particules Lentivirales d'Activation (m) ASCL1: sc-421562-LAC

ASCL1 (achaete-scute family bHLH transcription factor 1) chez la souris est un régulateur proneural de type basic helix-loop-helix (bHLH) qui déclenche l’engagement dans la lignée neuronale et les programmes de différenciation en se liant à des motifs E-box et en coordonnant les réseaux chromatinien et transcriptionnel. Il agit en amont de modules de gènes contrôlant la sortie du cycle cellulaire, la croissance des neurites et la spécification des sous-types neuronaux, en s’articulant avec l’inhibition latérale médiée par la signalisation Notch et d’autres signaux de mise en place des patrons du développement. Dans le système nerveux en développement et à l’âge adulte, ASCL1 contribue à la neurogenèse et aux transitions d’état des cellules souches/progénitrices neurales, et une expression dérégulée a été associée à des programmes de lignée aberrants dans des contextes de maladies neurodéveloppementales et liées au système neuroendocrinien. Parce qu’ASCL1 est un régulateur maître des décisions de destin cellulaire, il est largement utilisé pour étudier les circuits transcriptionnels, la reprogrammation neuronale et la dynamique de différenciation dans des systèmes modèles murins.

Les particules d'activation lentivirales ASCL1 (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Ascl1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales ASCL1 (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Ascl1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de ASCL1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Ascl1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.