Particules Lentivirales d'Activation (m) ASC/TMS1/PYCARD: sc-426209-LAC

Pycard code pour ASC/TMS1/PYCARD, un adaptateur essentiel des complexes inflammasomes, qui relie des protéines capteurs telles que NLRP3 et AIM2 à la caspase‑1 (CASP1) via ses domaines PYD et CARD. La polymérisation d’ASC pilote l’assemblage de l’inflammasome, l’activation de la caspase‑1 et, en aval, la maturation d’IL‑1β et d’IL‑18, reliant la détection des agents pathogènes et des signaux de danger à la signalisation inflammatoire et aux programmes de mort cellulaire pyroptotique. Dans les cellules murines, l’activité des inflammasomes dépendante de Pycard influence les réponses immunitaires innées, l’activation des macrophages et des cellules dendritiques, ainsi que le remodelage tissulaire dépendant des cytokines. Une signalisation d’ASC dérégulée a été impliquée dans des phénotypes inflammatoires et pseudo‑auto‑immuns, une susceptibilité aux infections et des pathologies associées à l’inflammation, faisant de Pycard un nœud clé pour l’étude des voies de l’immunité innée.

Les particules d'activation lentivirales ASC/TMS1/PYCARD (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Pycard dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales ASC/TMS1/PYCARD (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Pycard, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de ASC/TMS1/PYCARD. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Pycard ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.