Plasmide CRISPR d'Activation (h) ART1: sc-403742-ACT

Le gène humain **ART1** code l’ecto-ADP-ribosyltransférase 1, une enzyme de surface cellulaire ancrée par un GPI qui catalyse la mono-ADP-ribosylation de protéines extracellulaires et associées à la membrane en utilisant le **NAD+** comme substrat. Cette modification post-traductionnelle peut altérer la fonction des récepteurs, l’adhésion et la signalisation liée à l’immunité à l’interface cellulaire, reliant ainsi ART1 à la régulation de la communication cellulaire et des réponses au stress. L’activité d’ART1 a été étudiée dans des microenvironnements inflammatoires et dans des phénotypes associés au cancer, où des variations de l’ADP-ribosylation de surface peuvent influencer les interactions tumeur–système immunitaire et le comportement métastatique. En tant que médiateur d’une signalisation extracellulaire dépendante du NAD+, ART1 constitue un point d’entrée exploitable pour étudier comment l’ADP-ribosylation façonne les interactions entre voies de signalisation dans les cellules humaines.

ART1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ART1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ART1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ART1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ART1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ART1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ART1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ART1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ART1 dans les cellules tumorales présentant une expression de ART1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.