Plasmide CRISPR/Cas9 KO ARP-1 (m): sc-419169

Présentation

Nr2f2 code le récepteur nucléaire ARP-1 (également appelé COUP-TFII), un facteur de transcription régulé par des ligands qui se fixe sur des éléments de réponse hormonale afin de coordonner des programmes géniques contrôlant le développement embryonnaire, le remodelage vasculaire, la lymphangiogenèse et l’homéostasie métabolique. ARP-1 intègre des signaux provenant de l’acide rétinoïque et d’autres réseaux de récepteurs nucléaires pour moduler l’état de la chromatine et l’activité transcriptionnelle dans des contextes mésenchymateux, endothéliaux et stromaux. Dans des modèles murins, une activité altérée de Nr2f2 affecte la spécification du destin cellulaire, la signalisation angiogénique et l’organisation des tissus, reliant cette voie à des anomalies du développement et à une biologie vasculaire dérégulée. Les circuits transcriptionnels régulés par Nr2f2 sont également utilisés pour étudier les mécanismes qui façonnent les microenvironnements tumoraux, la migration cellulaire et les interactions épithélio-mésenchymateuses dans des systèmes pertinents pour le cancer, sans impliquer de retombées cliniques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ARP-1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Nr2f2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Nr2f2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Nr2f2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ARP-1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Nr2f2 pour l'étude de la signalisation de ARP-1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Nr2f2 essentiels à la fonction de ARP-1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Nr2f2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ARP-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le ARP-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Nr2f2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ARP-1 plasmide HDR (m) et le ARP-1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Nr2f2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Nr2f2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.