ARMCX1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-407214-ACT

ARMCX1 (Armadillo-Repeat-haltig, X-chromosomal 1) kodiert ein mitochondrienassoziiertes Armadillo-Repeat-Protein, das vermutlich an der Regulation des mitochondrialen Transports, der Dynamik und der Qualitätskontrolle beteiligt ist – abhängig vom jeweiligen Zelltyp. Über Interaktionen mit dem Zytoskelett sowie der Maschinerie zur Positionierung von Organellen wurde ARMCX1 mit Prozessen wie dem Neuritenauswuchs, zellulären Stressantworten und der Aufrechterhaltung der mitochondrialen Homöostase in Verbindung gebracht. Eine veränderte Aktivität der ARMCX-Proteinfamilie wurde mit einer Fehlregulation der Apoptose, metabolischem Remodeling und Veränderungen der Zellmotilität assoziiert, was ARMCX1 für Studien in der Neurobiologie und zu krebsrelevanten Phänotypen interessant macht. Als X-chromosomales Gen bietet ARMCX1 zudem einen nützlichen Rahmen, um geschlechtsbiased (geschlechtsspezifisch) regulierte Mechanismen und Dosiseffekte in humanen Zellmodellen zu untersuchen.

ARMCX1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ARMCX1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

ARMCX1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ARMCX1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ARMCX1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen ARMCX1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ARMCX1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von ARMCX1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des ARMCX1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ARMCX1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.