Plasmide CRISPR/Cas9 KO ARK-3 (m): sc-423193

Présentation

Aurkc code pour l’Aurora kinase C (ARK-3), une kinase sérine/thréonine qui régule la dynamique des chromosomes et la division cellulaire par phosphorylation de substrats mitotiques impliqués dans la fonction du centrosome, l’assemblage du fuseau et la cytokinèse. Dans les cellules germinales de souris, l’activité d’AURKC est particulièrement importante pour la progression méiotique et la ségrégation chromosomique fidèle, en interaction avec les principaux réseaux régulateurs mitotiques qui coordonnent les attaches kinétochore–microtubules et le point de contrôle du fuseau. La dérégulation de la signalisation des kinases Aurora est associée à l’aneuploïdie et à l’instabilité génomique, des processus fréquemment étudiés en biologie de la reproduction, en génétique du développement et dans des modèles du cycle cellulaire pertinents pour le cancer. La perturbation d’Aurkc constitue donc un point d’entrée utile pour disséquer les mécanismes de mauvaise ségrégation des chromosomes et du contrôle du cycle cellulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ARK-3 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Aurkc dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Aurkc, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Aurkc à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ARK-3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Aurkc pour l'étude de la signalisation de ARK-3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Aurkc essentiels à la fonction de ARK-3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Aurkc pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ARK-3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le ARK-3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Aurkc. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ARK-3 plasmide HDR (m) et le ARK-3 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Aurkc pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Aurkc définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.