ARID2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401863-ACT

ARID2 kodiert eine Untereinheit des ATP-abhängigen Chromatin-Remodeling-Komplexes PBAF (SWI/SNF), die eine AT-reiche Interaktionsdomäne enthält und die Nukleosomenpositionierung sowie Transkriptionsprogramme reguliert. Durch die koordinierte Steuerung der Zugänglichkeit von Enhancern und Promotoren beeinflusst ARID2 die Linienspezifikation, DNA-Schadensantworten und zelluläre Differenzierungszustände. Eine veränderte ARID2-Aktivität wurde mit einer dysregulierten epigenetischen Kontrolle und Transkriptionsnetzwerken in Verbindung gebracht, die an der Tumorentstehung und anderen Erkrankungen beteiligt sind, die durch abweichende Chromatinregulation gekennzeichnet sind. Als Bestandteil eines Chromatin-Remodelers wird ARID2 häufig in Signalwegen untersucht, die die Genomstabilität, die Regulation interferon-stimulierter Gene sowie die kontextabhängige Kontrolle von Zellzyklus und Apoptose steuern.

ARID2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ARID2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

ARID2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ARID2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ARID2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen ARID2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ARID2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von ARID2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des ARID2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ARID2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.