ArgRS CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-430545

Übersicht

Das murine Gen **Rars** kodiert die Arginyl-tRNA-Synthetase (ArgRS), eine zentrale zytosolische Aminoacyl-tRNA-Synthetase, die Arginin an die zugehörige tRNA bindet und damit eine präzise Translation sowie die Homöostase des Proteoms unterstützt. Durch die Kontrolle des Angebots an beladener tRNA^Arg beeinflusst ArgRS die Translationsgenauigkeit, Stressreaktionen im Zusammenhang mit der Verfügbarkeit von Aminosäuren und nachgelagerte Effekte auf Programme für Zellwachstum und Differenzierung. Eine veränderte Funktion von Aminoacyl-tRNA-Synthetasen wurde mit neurodevelopmentalen und neuromuskulären Phänotypen, Immundysregulation sowie Proliferationsdefekten in Verbindung gebracht, was **Rars** zu einem relevanten Knotenpunkt macht, um zu untersuchen, wie translationsbezogene Störungen zelluläre Zustände umformen. In Mausmodellen bietet eine Störung von **Rars** einen direkten Ansatz, um die Funktion essenzieller Gene, kompensatorische Netzwerke von tRNA-Synthetasen und kontextabhängige Empfindlichkeit gegenüber Proteostase-Stress zu analysieren.

Das ArgRS CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Rars-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Rars-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Rars nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ArgRS-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Rars-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ArgRS-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Rars-Exone abzielen, die für die ArgRS-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Rars-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ArgRS CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom ArgRS CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Rars-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ArgRS HDR-Plasmid (m) und ArgRS HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Rars-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Rars-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.