Plasmide CRISPR/Cas9 KO ArgRS (h): sc-409431

Présentation

RARS code l’arginyl‑ARNt synthétase humaine (ArgRS), une aminoacyl‑ARNt synthétase cytosolique qui fixe l’arginine sur son ARNt cognat afin d’assurer la fidélité de la traduction et une synthèse protéique efficace. ArgRS participe aux voies centrales du métabolisme des ARN et de la traduction, et peut interagir fonctionnellement avec des complexes multi‑synthétases qui coordonnent la biosynthèse des protéines avec les programmes cellulaires de stress et de signalisation. La perturbation de l’activité des aminoacyl‑ARNt synthétases a été associée à un déséquilibre de la protéostasie et à des réponses au stress altérées, faisant de RARS un gène pertinent pour étudier les mécanismes reliant le contrôle de la traduction à la viabilité et à la différenciation cellulaires. RARS est également étudié dans le contexte de variants associés à des maladies, affectant le chargement des ARNt et leurs conséquences en aval sur la qualité du protéome.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ArgRS (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène RARS dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du RARS, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert RARS à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ArgRS.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en RARS pour l'étude de la signalisation de ArgRS, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de RARS essentiels à la fonction de ArgRS
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de RARS pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ArgRS plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le ArgRS plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus RARS. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ArgRS plasmide HDR (h) et le ArgRS (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie RARS pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles RARS définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.