arfaptin 1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-405033-ACT

ARFIP1はarfaptin 1をコードしており、arfaptin 1はArfファミリーの低分子GTPase結合タンパク質で、膜脂質と結合してエンドサイトーシスに伴う膜輸送や小胞形成に関与します。活性化ARFタンパク質をBARドメイン介在の膜曲率感知機構に結び付けることで、arfaptin 1はカーゴの選別、リサイクリング、ならびにゴルジ体／エンドソーム区画の構築・維持の協調を助けます。これらの過程は受容体のターンオーバーや細胞内シグナル伝達の動態に影響し、ARFIP1依存的な輸送を細胞増殖やストレス応答を制御する経路と結び付けます。膜輸送の破綻は増殖性疾患や神経変性疾患の生物学で共通して見られる特徴であり、そのためARFIP1は小胞介在性制御の機構研究に有用な結節点となります。

arfaptin 1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ARFIP1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

arfaptin 1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ARFIP1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はARFIP1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性arfaptin 1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のARFIP1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるarfaptin 1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびARFIP1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるarfaptin 1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。