ARF5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-419190

Übersicht

Arf5 kodiert den ADP-Ribosylierungsfaktor 5 (ARF5), eine kleine GTPase, die zwischen GDP- und GTP-gebundenen Zuständen wechselt, um Membrantransport und Organell-Dynamik zu regulieren. ARF5 koordiniert die Vesikelknospung und die Sortierung von Fracht an Golgi- und endosomalen Membranen und trägt über ARF-Effektorwege zu COPI-abhängigem Transport, Phospholipid-Umbau und aktinassoziierten Prozessen bei. Durch die Steuerung sekretorischer und endozytotischer Flüsse beeinflusst ARF5 das Rezeptorrecycling, die Kompartimentierung intrazellulärer Signalwege und zelluläre Stressantworten. Fehlregulierte ARF-Familien-GTPase-Schaltkreise und Programme des Vesikeltransports werden häufig im Zusammenhang mit aberranter Proliferation, Migration und neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen untersucht, wodurch Arf5 ein relevantes Ziel in mechanistischen Krankheitsmodellen darstellt.

Das ARF5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Arf5-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Arf5-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Arf5 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ARF5-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Arf5-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ARF5-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Arf5-Exone abzielen, die für die ARF5-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Arf5-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ARF5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom ARF5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Arf5-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ARF5 HDR-Plasmid (m) und ARF5 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Arf5-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Arf5-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.