Plasmide CRISPR/Cas9 KO ARF5 (m): sc-419190

Présentation

Arf5 code le facteur d’ADP-ribosylation 5 (ARF5), une petite GTPase qui alterne entre des états liés au GDP et au GTP afin de réguler le trafic membranaire et la dynamique des organites. ARF5 coordonne le bourgeonnement des vésicules et le tri des cargaisons au niveau de l’appareil de Golgi et des membranes endosomales, et contribue au transport dépendant de COPI, au remodelage des phospholipides et à des processus associés à l’actine via des voies effectrices des ARF. En modulant les flux sécrétoires et endocytiques, ARF5 influence le recyclage des récepteurs, la compartimentation de la signalisation intracellulaire et les réponses au stress cellulaire. Les dérégulations des circuits de GTPases de la famille ARF et des programmes de transport vésiculaire sont fréquemment étudiées dans le contexte de phénotypes de prolifération et de migration aberrantes, ainsi que de troubles du neurodéveloppement, ce qui fait d’Arf5 une cible pertinente dans des modèles mécanistiques de maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ARF5 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Arf5 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Arf5, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Arf5 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ARF5.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Arf5 pour l'étude de la signalisation de ARF5, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Arf5 essentiels à la fonction de ARF5
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Arf5 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ARF5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le ARF5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Arf5. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ARF5 plasmide HDR (m) et le ARF5 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Arf5 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Arf5 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.