Aquaporin 9/AQP9 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401298

Übersicht

AQP9 kodiert Aquaporin 9, einen Aquaglyceroporin-Kanal in der Plasmamembran, der den bidirektionalen Transport von Wasser und kleinen gelösten Stoffen wie Glycerol, Harnstoff und anderen neutralen Metaboliten erleichtert. Durch die Regulation des Glycerolflusses beeinflusst AQP9 die zelluläre Energiebilanz und den Lipidstoffwechsel und unterstützt Prozesse wie die Glukoneogenese und die osmotische Homöostase in metabolisch aktiven Geweben. In immunologischen und epithelialen Kontexten wurde eine veränderte AQP9-Aktivität mit Änderungen der Funktion von Entzündungszellen und der Barrierephysiologie in Verbindung gebracht, wodurch seine Expression mit Signalwegen verknüpft ist, die Membrantransport mit Stoffwechsel- und Stressantworten koppeln. Eine dysregulierte AQP9-Expression wurde in mehreren krankheitsrelevanten Situationen beschrieben, darunter Stoffwechselstörungen und krebsassoziierte Phänotypen, bei denen der Soluttransport Proliferations- und Überlebensprogramme mitprägen kann.

Das Aquaporin 9/AQP9 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des AQP9-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des AQP9-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von AQP9 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Aquaporin 9/AQP9-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von AQP9-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Aquaporin 9/AQP9-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf AQP9-Exone abzielen, die für die Aquaporin 9/AQP9-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere AQP9-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Aquaporin 9/AQP9 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Aquaporin 9/AQP9 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des AQP9-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Aquaporin 9/AQP9 HDR-Plasmid (h) und Aquaporin 9/AQP9 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von AQP9-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten AQP9-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.