Aquaporin 8/AQP8 Double Nickase Plasmid (h): sc-402490-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Aquaporin 8/AQP8 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Aquaporin 8/AQP8 Double-Nickase-Plasmid (h) und Aquaporin 8/AQP8 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf AQP8 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Aquaporin 8/AQP8: sc-81870
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Aquaporin 8/AQP8 Double Nickase Plasmid (h) | sc-402490-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Aquaporin 8/AQP8 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402490-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
AQP8 kodiert Aquaporin 8, einen integralen Membrankanal, der den transmembranen Wassertransport erleichtert und – abhängig vom zellulären Kontext – auch kleine neutrale gelöste Stoffe wie Wasserstoffperoxid leiten kann. AQP8 trägt zur osmotischen Homöostase, zum epithelialen Flüssigkeitstransport und zur intrazellulären Redoxsignalgebung bei und verknüpft damit die Membranpermeabilität mit Prozessen wie mitochondrialer Funktion, metabolischer Regulation und inflammatorischer Signalübertragung. Eine veränderte AQP8-Expression oder -Lokalisierung wurde mit Störungen der epithelialen Barrierefunktion und einer dysregulierten Antwort auf oxidativen Stress in Verbindung gebracht – Merkmale, die in verschiedenen pathophysiologischen Kontexten beobachtet werden. In humanen Geweben wird AQP8 häufig im Zusammenhang mit der hepatobiliären Physiologie, dem gastrointestinalen epithelialen Transport und der Modulation des oxidativen Bursts in Immunzellen untersucht.
Aquaporin 8/AQP8 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des AQP8-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von AQP8 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die AQP8-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit AQP8-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.