Plasmide CRISPR d'Activation (h) Aquaporin 7/AQP7: sc-402564-ACT

AQP7 code l’aquaporine 7, un canal membranaire aquaglycéroporine qui facilite le transport bidirectionnel de l’eau et de petits solutés neutres, en particulier le glycérol, à travers la membrane plasmique. Dans les adipocytes et les tissus métaboliquement actifs, l’efflux de glycérol médié par AQP7 contribue au renouvellement des triglycérides et relie la lipolyse à l’utilisation systémique du glycérol, influençant l’homéostasie énergétique cellulaire. La régulation d’AQP7 affecte l’équilibre osmotique, la perméabilité membranaire et la disponibilité des substrats métaboliques, en interaction avec le métabolisme lipidique et les flux de substrats gluconéogènes. Des altérations de l’expression ou de la fonction d’AQP7 ont été étudiées dans des contextes de dysfonction du tissu adipeux, de phénotypes métaboliques associés à l’insulinorésistance et de gestion du glycérol spécifique à certains tissus, pertinents pour la recherche cardiométabolique.

Aquaporin 7/AQP7 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de AQP7 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Aquaporin 7/AQP7 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus AQP7 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription AQP7, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Aquaporin 7/AQP7. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus AQP7 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Aquaporin 7/AQP7 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Aquaporin 7/AQP7 dans les cellules tumorales présentant une expression de AQP7 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.