Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Aquaporin 4/AQP4 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400258-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- Aquaporin 4/AQP4 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- Aquaporin 4/AQP4ダブルニカースプラスミド（h）およびAquaporin 4/AQP4ダブルニカースプラスミド（h2）は、AQP4を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: Aquaporin 4/AQP4 抗体 (4/18): sc-32739
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
Aquaporin 4/AQP4 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-400258-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Aquaporin 4/AQP4 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-400258-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ヒトAQP4はアクアポリン4（aquaporin-4）をコードしており、アストロサイトの終足（エンドフット）に豊富に局在する主要な水チャネルとして、細胞膜を介した迅速な双方向の水移動を支え、脳内の水分恒常性の維持に寄与する。AQP4はイオンフラックスや神経伝達と連動することで、アストロサイトの体積調節、細胞外空間の動態、さらには間質溶質のクリアランスに影響するグリンパティック輸送過程にも関与する。AQP4の極性膜局在は血管周囲の足場（スキャフォールディング）複合体と協調して制御されており、血液脳関門の生理や浸透圧ストレス応答と密接に結び付いている。AQP4の発現量や局在の破綻は、神経炎症性・脱髄性疾患、脳浮腫、発作感受性の変化などと関連づけられており、中枢神経系における体液バランスとグリア生物学の機序解明に向けた重要な研究標的となっている。
Aquaporin 4/AQP4 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における AQP4 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、AQP4内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、AQP4の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、AQP4が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。