Aquaporin 4/AQP4 Double Nickase Plasmid (h): sc-400258-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Aquaporin 4/AQP4 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Aquaporin 4/AQP4 Double-Nickase-Plasmid (h) und Aquaporin 4/AQP4 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf AQP4 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Aquaporin 4/AQP4: sc-32739
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Aquaporin 4/AQP4 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400258-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Aquaporin 4/AQP4 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400258-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Humanes AQP4 kodiert Aquaporin-4, einen wichtigen Wasserkanal, der an den Endfüßchen von Astrozyten angereichert ist, einen raschen bidirektionalen Wassertransport über die Plasmamembran ermöglicht und zur Aufrechterhaltung der Wasserhomöostase im Gehirn beiträgt. Durch die Kopplung an Ionenflüsse und Neurotransmission trägt AQP4 zur Volumenregulation von Astrozyten, zur Dynamik des Extrazellulärraums sowie zu glymphatischen Transportprozessen bei, die die Clearance interstitieller gelöster Stoffe beeinflussen. Seine polarisierte Membranlokalisation wird mit perivaskulären Gerüst-/Scaffolding-Komplexen koordiniert und ist eng mit der Physiologie der Blut-Hirn-Schranke sowie osmotischen Stressantworten verknüpft. Eine Fehlregulation der AQP4-Expression oder -Lokalisierung wurde mit neuroinflammatorischen und demyelinisierenden Erkrankungen, zerebralem Ödem und einer veränderten Anfallsanfälligkeit in Verbindung gebracht, was AQP4 zu einem wichtigen Ziel für mechanistische Studien zur ZNS-Flüssigkeitsbalance und Glia-Biologie macht.
Aquaporin 4/AQP4 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des AQP4-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von AQP4 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die AQP4-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit AQP4-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.