Plasmide CRISPR/Cas9 KO apolipoprotein E/apoE (m): sc-419167

Présentation

Le gène Apoe de la souris code l’apolipoprotéine E (apoE), une protéine sécrétée associée aux lipoprotéines qui régule le transport du cholestérol et des triglycérides dans le plasma et le système nerveux central. L’apoE assure la capture et la redistribution des lipides de manière dépendante des récepteurs via ses interactions avec des membres de la famille des récepteurs des LDL, influençant la clairance des particules lipoprotéiques, l’homéostasie membranaire et les voies d’efflux du cholestérol cellulaire. Dans le cerveau, l’apoE participe au trafic lipidique glial, au maintien synaptique et à la signalisation neuro-inflammatoire, reliant le métabolisme lipidique à la résilience neuronale. Les altérations de la fonction d’Apoe sont largement utilisées pour modéliser les mécanismes de dyslipidémie et d’athérosclérose, et elles occupent aussi une place centrale dans les études expérimentales des dépôts amyloïdes, des réponses microgliales et des processus neurodégénératifs.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO apolipoprotein E/apoE (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Apoe dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Apoe, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Apoe à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine apolipoprotein E/apoE.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Apoe pour l'étude de la signalisation de apolipoprotein E/apoE, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Apoe essentiels à la fonction de apolipoprotein E/apoE
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Apoe pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le apolipoprotein E/apoE plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le apolipoprotein E/apoE plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Apoe. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le apolipoprotein E/apoE plasmide HDR (m) et le apolipoprotein E/apoE (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Apoe pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Apoe définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.