apoH CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-419168

Übersicht

Apoh kodiert Apolipoprotein H (apoH; β2‑Glykoprotein I), ein zirkulierendes, phospholipidbindendes Glykoprotein, das mit anionischen Membranen und Lipoproteinpartikeln assoziiert. Bei Mäusen ist apoH an Prozessen des Lipidtransports und der Lipid-Clearance beteiligt und greift über seine Interaktionen mit negativ geladenen Phospholipiden, die bei zellulärer Aktivierung oder Schädigung exponiert werden, in gerinnungsbezogene und komplementassoziierte Signalwege ein. Eine veränderte APOH/apoH-Biologie wird mit einer dysregulierten Hämostase und inflammatorischen vaskulären Prozessen in Verbindung gebracht und wird häufig im Kontext der autoantikörpervermittelten Erkennung von Phospholipiden untersucht. Diese Funktionen machen Apoh zu einem nützlichen Ziel, um in experimentellen Modellen den Lipid–Immun‑Crosstalk, die Biologie membranbindender Proteine und Mechanismen zu untersuchen, die Entzündung mit thrombosebezogenen Phänotypen verknüpfen.

Das apoH CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Apoh-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Apoh-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Apoh nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die apoH-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Apoh-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der apoH-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Apoh-Exone abzielen, die für die apoH-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Apoh-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom apoH CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom apoH CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Apoh-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das apoH HDR-Plasmid (m) und apoH HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Apoh-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Apoh-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.