APOBEC3F Double Nickase Plasmid (h): sc-406610-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das APOBEC3F Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- APOBEC3F Double-Nickase-Plasmid (h) und APOBEC3F Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf APOBEC3F abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
APOBEC3F Double Nickase Plasmid (h) | sc-406610-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
APOBEC3F Double Nickase Plasmid (h2) | sc-406610-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Humanes APOBEC3F kodiert eine zinkabhängige Cytidin-Deaminase, die einzelsträngige DNA durch die Umwandlung von Cytidin zu Uridin editiert und dadurch Mutationen einführt, welche die Replikation von Retroviren und endogenen Retroelementen einschränken. Als Teil der APOBEC3-Familie ist APOBEC3F an intrinsischen Immunitätswegen beteiligt, die mit viralen Replikationsintermediaten, der DNA-Schadenssignalgebung und der Genomüberwachung verknüpft sind. Seine Aktivität wird durch Interaktionen mit viralen Antagonisten wie HIV-1 Vif moduliert, wodurch die Biologie von APOBEC3F mit Wirt–Pathogen-Wettrüsten und viralen Escape-Mechanismen verbunden ist. Eine fehlregulierte oder fehlgeleitete Deaminierung durch APOBEC-Enzyme wird zudem mit Mutationsprozessen in Verbindung gebracht, die zur Genominstabilität beitragen können, was APOBEC3F zu einem relevanten Faktor für Studien zu Mutationssignaturen und entzündlichen Mikroumgebungen macht.
APOBEC3F Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des APOBEC3F-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von APOBEC3F abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die APOBEC3F-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit APOBEC3F-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.