Particules Lentivirales d'Activation (h) APOBEC3A: sc-418267-LAC

L’APOBEC3A humain (apolipoprotein B mRNA editing enzyme catalytic subunit 3A) est une désaminase de cytidine qui catalyse l’édition C→U dans l’ADN et l’ARN simple brin, contribuant à l’immunité intrinsèque en restreignant la réplication virale et en limitant l’activité des rétroéléments. En agissant sur l’ADN simple brin exposé lors du stress réplicatif et de la réparation de l’ADN, APOBEC3A interagit avec les voies de maintien du génome et peut accroître la charge mutationnelle en cas de dérégulation. Une activité aberrante d’APOBEC3A a été associée à des signatures mutationnelles caractéristiques observées dans de nombreux types de tumeurs et est étudiée dans le contexte de l’instabilité génomique liée à l’inflammation. Les chercheurs utilisent APOBEC3A comme modèle pour explorer la restriction antivirale, les réponses aux dommages de l’ADN et les mécanismes qui façonnent la mutagenèse somatique.

Les particules d'activation lentivirales APOBEC3A (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de APOBEC3A dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales APOBEC3A (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription APOBEC3A, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de APOBEC3A. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif APOBEC3A ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.