APOBEC3A Double Nickase Plasmid (h): sc-418267-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das APOBEC3A Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- APOBEC3A Double-Nickase-Plasmid (h) und APOBEC3A Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf APOBEC3A abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
APOBEC3A Double Nickase Plasmid (h) | sc-418267-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
APOBEC3A Double Nickase Plasmid (h2) | sc-418267-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Human APOBEC3A kodiert eine einzelsträngige DNA-Cytidin-Deaminase aus der APOBEC-Familie, die C-zu-U-Editierungen katalysiert und durch Replikation sowie Verarbeitung im Rahmen der Basenexzisionsreparatur Mutationen erzeugen kann. APOBEC3A wird durch Signalwege der angeborenen Immunität, einschließlich Interferon-Pathways, induziert und trägt zur zellulären Abwehr gegen virale Genome und endogene Retroelemente bei. Seine Aktivität überschneidet sich mit Prozessen der DNA-Schadensantwort und der Genomwartung; eine fehlregulierte Expression oder falsche Zielsteuerung ist mit charakteristischen Mutationssignaturen verbunden, die in mehreren Krebsarten beobachtet werden. Daher wird APOBEC3A intensiv hinsichtlich seiner Rollen bei antiviraler Restriktion, entzündungsassoziierter Mutagenese und Mechanismen genomischer Instabilität untersucht.
APOBEC3A Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des APOBEC3A-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von APOBEC3A abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die APOBEC3A-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit APOBEC3A-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.