ApoA-V CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402213-ACT

Humanes APOA5 kodiert Apolipoprotein A‑V (ApoA‑V), ein in der Leber stark exprimiertes, sezerniertes Apolipoprotein, das die Homöostase der Plasma-Triglyzeride moduliert, indem es den Stoffwechsel von Very-Low-Density-Lipoproteinen (VLDL) reguliert und die lipoproteinlipaseabhängige Triglyzeridhydrolyse verstärkt. ApoA‑V ist an Transport- und Clearance-Wegen von Lipoproteinen beteiligt, beeinflusst die Verarbeitung von Remnant-Partikeln sowie deren hepatische Aufnahme. Genetische Variation oder eine veränderte Expression von APOA5 ist stark mit Hypertriglyzeridämie und weiteren Dyslipidämie-Phänotypen assoziiert und verknüpft diese Achse mit der Biologie kardiometabolischer Risiken. Entsprechend wird APOA5 häufig im Kontext der Lipidverarbeitung in Hepatozyten, von Nüchtern-/Nahrungsaufnahme-Antworten und von transkriptionellen Netzwerken, die den Lipidstoffwechsel steuern, untersucht.

ApoA-V Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen APOA5-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

ApoA-V Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des APOA5-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der APOA5-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen ApoA-V-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native APOA5-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von ApoA-V-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des ApoA-V-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem APOA5-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.