Plasmide CRISPR/Cas9 KO APNG (m): sc-435240

Présentation

Le gène murin **Mpg** code l’**ADN N‑glycosylase des alkylpurines** (**APNG**), une enzyme de réparation par excision de base (BER) qui reconnaît et excise diverses lésions des purines alkylées et désaminées, notamment la **3‑méthyladénine** et l’**hypoxanthine**. En initiant l’élimination des bases endommagées, APNG contribue à maintenir la fidélité de la réplication et à limiter la mutagenèse due au métabolisme endogène et aux génotoxines environnementales. L’activité d’APNG s’articule avec des facteurs centraux de la BER tels qu’**APEX1**, **POLβ** et **XRCC1** pour achever le traitement des lésions et la restauration du brin. Des altérations de la fonction **MPG/APNG** ont été associées à des phénotypes d’instabilité génomique pertinents pour la recherche sur la carcinogenèse et à une sensibilité au stress d’alkylation de l’ADN dans des modèles cellulaires et murins.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO APNG (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Mpg dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Mpg, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Mpg à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine APNG.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Mpg pour l'étude de la signalisation de APNG, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Mpg essentiels à la fonction de APNG
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Mpg pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le APNG plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le APNG plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Mpg. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le APNG plasmide HDR (m) et le APNG (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Mpg pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Mpg définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.