APNG CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-435240

Übersicht

Das Mausgen **Mpg** kodiert die Alkylpurin-DNA-N-Glykosylase (APNG), ein Enzym der Basenexzisionsreparatur (BER), das eine Reihe alkylierter und desaminierter Purinläsionen erkennt und herausschneidet, darunter 3‑Methyladenin und Hypoxanthin. Durch das Einleiten der Entfernung geschädigter Basen trägt APNG zur Aufrechterhaltung der Replikationstreue bei und begrenzt die Mutagenese, die aus dem endogenen Stoffwechsel und aus Umweltgenotoxinen entsteht. Die APNG-Aktivität ist mit zentralen BER-Faktoren wie **APEX1**, **POLβ** und **XRCC1** verzahnt, um die Läsionsverarbeitung und die Wiederherstellung des Strangs zu vervollständigen. Eine veränderte MPG/APNG-Funktion wurde in Zell- und Mausmodellen mit Phänotypen genomischer Instabilität in Verbindung gebracht, die für die Karzinogenese-Forschung relevant sind, sowie mit einer erhöhten Empfindlichkeit gegenüber DNA-Alkylierungsstress.

Das APNG CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Mpg-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Mpg-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Mpg nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die APNG-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Mpg-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der APNG-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Mpg-Exone abzielen, die für die APNG-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Mpg-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom APNG CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom APNG CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Mpg-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das APNG HDR-Plasmid (m) und APNG HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Mpg-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Mpg-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.