Plásmido Doble Nickase (m) APG5/ATG5: sc-419149-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)APG5/ATG5 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa APG5/ATG5 (m) y el plásmido de doble nickasa APG5/ATG5 (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Atg5. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: APG5/ATG5 Anticuerpo (C-1): sc-133158
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) APG5/ATG5 | sc-419149-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (m2) APG5/ATG5 | sc-419149-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El gen Atg5 de ratón codifica APG5/ATG5, un factor central de la autofagia requerido para la biogénesis del autofagosoma mediante el sistema de conjugación ATG12–ATG5–ATG16L1, que favorece la lipidación de LC3 y la elongación del fagóforo. Al coordinar la macroautofagia, ATG5 influye en el control de calidad citoplasmático, la homeostasis mitocondrial y la adaptación al estrés, con efectos posteriores sobre la señalización inmunitaria innata y el tono inflamatorio. La autofagia dependiente de ATG5 alterada se ha vinculado, en modelos experimentales, con una proteostasis desregulada asociada a la neurodegeneración, susceptibilidad a infecciones, disfunción metabólica y biología tumoral. Por ello, la perturbación de Atg5 se utiliza ampliamente para discernir mecanismos dependientes de la autofagia frente a mecanismos independientes de la autofagia en procesos de supervivencia celular, diferenciación y vías inmunitarias.
APG5/ATG5 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Atg5 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Atg5. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Atg5. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Atg5 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.