Plasmide Double Nickase (h) Apg-2: sc-404587-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Apg-2 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Apg-2 Double Nickase (h) et le plasmide Apg-2 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant HSPA4. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Apg-2 Antibody (A-7): sc-365366
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Apg-2 | sc-404587-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Apg-2 | sc-404587-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HSPA4 code pour Apg-2 (HSPH2), un co‑chaperon de la famille HSP70 dépendant de l’ATP, qui soutient la protéostasie en favorisant le repliement et le repliement correct (refolding) des protéines clientes, ainsi que le tri des protéines endommagées lors du stress cellulaire. Apg-2 participe à la réponse au choc thermique et aux réseaux de contrôle qualité des protéines, en interface avec les voies ubiquitine–protéasome et autophagie, contribuant ainsi au maintien de l’intégrité du cytosquelette et de l’homéostasie des organites. Par ces fonctions, HSPA4 influence la résistance au stress, la susceptibilité à l’apoptose et la dynamique des voies de signalisation dans les cellules hautement sécrétoires ou à prolifération rapide. Le dérèglement de la capacité chaperonne et des voies d’adaptation au stress impliquant Apg-2 a été associé à des phénotypes de stress protéotoxique et à des contextes pertinents pour la biologie du cancer et la recherche sur les maladies neurodégénératives.
Apg-2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus HSPA4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de HSPA4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de HSPA4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de HSPA4.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.