Apelin Double Nickase Plasmid (h): sc-401548-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Apelin Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Apelin Double-Nickase-Plasmid (h) und Apelin Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf APLN abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Apelin: sc-293441
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Apelin Double Nickase Plasmid (h) | sc-401548-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Apelin Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401548-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das humane Gen **APLN** kodiert Apelin, einen sezernierten peptidischen Liganden für den G‑Protein‑gekoppelten Rezeptor **APJ/APLNR**, der den Gefäßtonus, angiogene Signalwege, die kardiale Kontraktilität und die Flüssigkeitshomöostase reguliert. Die Bindung von Apelin an APJ aktiviert nachgeschaltete Signalwege wie **PI3K/AKT**, **ERK/MAPK** sowie **eNOS/NO** und beeinflusst dadurch die Migration von Endothelzellen, die Reaktionsfähigkeit glatter Muskelzellen und den metabolischen Crosstalk in Fett- und Skelettmuskelgewebe. Eine dysregulierte Apelin-Signalgebung wird mit kardiovaskulärem Remodeling, pulmonalen Gefäßerkrankungen und metabolischen Dysfunktionen in Verbindung gebracht, wodurch APLN einen nützlichen Knotenpunkt zur Untersuchung der Peptid‑GPCR‑Kommunikation unter Stress und Entzündung darstellt. In der Tumorbiologie kann Apelin hypoxieadaptive Programme und die Dynamik vaskulärer Nischen beeinflussen und damit mechanistische Studien zur Signalgebung im Mikromilieu unterstützen, ohne einen klinischen Nutzen zu implizieren.
Apelin Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des APLN-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von APLN abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die APLN-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit APLN-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.