Apelin CRISPR Activation Plasmid (m): sc-424407-ACT

Das Mausgen *Apln* kodiert Apelin, einen sezernierten peptidischen Liganden des APJ‑Rezeptors (APLNR), der die kardiovaskuläre Homöostase, angiogenes Sprießen, den Flüssigkeitshaushalt und die metabolische Signalübertragung reguliert. Die Bindung von Apelin an APLNR moduliert GPCR‑vermittelte Signalwege wie PI3K–AKT, MAPK/ERK sowie stickstoffmonoxidabhängige endotheliale Antworten und beeinflusst dadurch den Gefäßtonus und die Migration von Endothelzellen. Im zentralen Nervensystem und in peripheren Geweben trägt Apelin über koordinierte parakrine Signalgebung zur neuroendokrinen Regulation und zur Energiehomöostase bei. Eine dysregulierte *Apln*/Apelin‑Signalgebung wurde mit vaskulärem Remodeling, kardialen Stressantworten und metabolischer Dysfunktion in Verbindung gebracht, was ihren Einsatz als mechanistischen Knotenpunkt in kardiometabolischen und entzündungsbezogenen Forschungsmodellen unterstützt.

Apelin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Apln-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Apelin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Apln-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Apln-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Apelin-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Apln-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Apelin-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Apelin-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Apln-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.