Ape2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-407307

Übersicht

Human APEX2 kodiert die apurinische/apyrimidinische Endonuklease 2 (Ape2), eine Nuklease, die abasische Stellen erkennt und an der DNA-Basenexzisionsreparatur sowie der Aufrechterhaltung der Genomstabilität beteiligt ist. Ape2 trägt zur Verarbeitung geschädigter DNA-Enden bei und unterstützt zelluläre Antworten auf oxidative und replikationsassoziierte Läsionen, wodurch seine Aktivität mit dem Management von Replikationsstress und der Checkpoint-Signalgebung verknüpft ist. Indem die APEX2-Funktion die Anhäufung und Auflösung von DNA-Schäden beeinflusst, ist sie relevant für Mechanismen, die der Mutagenese und chromosomalen Instabilität zugrunde liegen, wie sie bei Krebs und anderen Erkrankungen mit eingeschränkter DNA-Reparaturkapazität beobachtet werden. Daher wird APEX2 häufig in Kontexten wie dem Crosstalk der DNA-Schadensantwort, der Biologie oxidativen Stresses und der Wahl von Reparaturwegen untersucht.

Das Ape2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des APEX2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des APEX2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von APEX2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Ape2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von APEX2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Ape2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf APEX2-Exone abzielen, die für die Ape2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere APEX2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Ape2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Ape2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des APEX2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Ape2 HDR-Plasmid (h) und Ape2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von APEX2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten APEX2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.