AP4A Hydrolase Double Nickase Plasmid (h): sc-407028-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das AP4A Hydrolase Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- AP4A Hydrolase Double-Nickase-Plasmid (h) und AP4A Hydrolase Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf NUDT2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: AP4A Hydrolase: sc-271410
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
AP4A Hydrolase Double Nickase Plasmid (h) | sc-407028-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
AP4A Hydrolase Double Nickase Plasmid (h2) | sc-407028-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
NUDT2 kodiert die humane Ap4A-Hydrolase, ein Enzym der Nudix-Familie, das Diadenosintetraphosphat (Ap4A) und verwandte dinukleosidische Polyphosphate hydrolysiert und damit die intrazelluläre „Alarmon“-Signalübertragung reguliert. Durch die Kontrolle des Ap4A-Umsatzes beeinflusst NUDT2 die Nukleotidhomöostase und stressresponsive Signalwege, die Transkriptionsprogramme, den RNA-Stoffwechsel und die Zellzyklusprogression betreffen. Eine veränderte NUDT2-Aktivität wurde in der Literatur mit Änderungen der Proliferationsfähigkeit, DNA-Schadensantworten und entzündlichen Signalnetzwerken in Verbindung gebracht, was NUDT2 für die Untersuchung kontextabhängiger Umbauprozesse von Signalkaskaden in humanen Zellen relevant macht. Da Ap4A-Spiegel Protein–Nukleotid-Interaktionen sowie nachgeschaltete Kinase-/Adapter-Signalwege modulieren können, eignet sich die Perturbation von NUDT2 zur Analyse der nukleotidvermittelten Kontrolle zellulärer Zustandsübergänge.
AP4A Hydrolase Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des NUDT2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von NUDT2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die NUDT2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit NUDT2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.