Plásmido CRISPR de Activación (h) AP4A Hydrolase: sc-407028-ACT
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmdo de Activación CRISPR (h) AP4A Hydrolase es un sistema de activación de la trascripción mediante una activación sinérgica (SAM), diseñado para incrementar la expresión de un gen concreto
- Los Plásmdo de Activación CRISPR (h) AP4A Hydrolase incluyen los siguientes tres plásmidos, con un radio 1:1:1 : plásmido codificador de la nucleasa Cas 9 desactivada (dCas9), (D10A y N863A) fusionadas al dominio de transactivación VP64 y el gen de resistencia a blasticidina; plásmido codificador de la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 y el gen de resistencia a Higromicina; plásmido codificador de la secuencia diana específica de 20 nt de ARN y el gen de resistencia a puromicina.
- El complejo SAM resultante se une en un punto específico a unos 200 -250 nt aguas arriba del inicio de la transcripción del gen diana y ofrece un potente punto de reclutamiento de factores de transcripción para un eficiente incremento de la activación genica.
- Los gRNA codificados por el plásmido de activación CRISPR AP4A Hydrolase (h) y el plásmido de activación CRISPR AP4A Hydrolase (h2) se dirigen a regiones reguladoras distintas situadas aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción de NUDT2. Puede que haya uno o ambos diseños disponibles
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: AP4A Hydrolase Anticuerpo (F-5): sc-271410
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido CRISPR de Activación (h) AP4A Hydrolase | sc-407028-ACT | 20 µg | $397.00 |
NUDT2 codifica la hidrolasa humana de Ap4A, una enzima de la familia Nudix que hidroliza el tetrafosfato de diadenosina (Ap4A) y otros polifosfatos de dinucleósidos relacionados, regulando así las reservas intracelulares de nucleótidos “alarmona”. Al controlar el recambio de Ap4A, la hidrolasa de Ap4A influye en la señalización por nucleótidos vinculada a las respuestas al estrés celular, el equilibrio redox y la coordinación de programas de transcripción y proliferación. La actividad de NUDT2 se entrecruza con vías más amplias del metabolismo de purinas y de la homeostasis de nucleótidos, que pueden moldear el procesamiento de ADN/ARN y la dinámica del ciclo celular. Se han descrito alteraciones del metabolismo de los polifosfatos de dinucleósidos y patrones de expresión modificados de NUDT2 en contextos asociados a enfermedades, lo que respalda su utilidad como un nodo mecanístico para estudiar la señalización adaptativa al estrés en células humanas.
AP4A Hydrolase El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de NUDT2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.
AP4A Hydrolase El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus NUDT2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.
Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional NUDT2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de AP4A Hydrolase. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo NUDT2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de AP4A Hydrolase en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía AP4A Hydrolase en células tumorales con expresión de NUDT2 silenciada o reducida.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.