AP1GBP1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-411596

Übersicht

SYNRG kodiert AP1GBP1 (Synergin Gamma), ein adaptorassoziiertes Protein, das an clathrinvermitteltem Transport und der Sortierung von Fracht zwischen dem trans-Golgi-Netzwerk und endosomalen Kompartimenten beteiligt ist. AP1GBP1 interagiert mit dem AP-1-Adaptor-Komplex und trägt zur Assemblierung des Vesikelmantels, zur Membrankrümmung sowie zur räumlichen Regulation von Sortiersignalen bei, die die Proteinlokalisation steuern. Über diese Funktionen unterstützt SYNRG die Homöostase sekretorischer und endozytotischer Wege und beeinflusst das Rezeptor-Recycling, das lysosomale Targeting und die Kompartiment-Identität. Eine gestörte intrazelluläre Trafficking-Regulation ist ein wiederkehrendes Merkmal neuroentwicklungs- und neurodegenerationsbezogener Prozesse sowie der Umprogrammierung onkogener Signalwege, wodurch SYNRG ein nützlicher Knotenpunkt für mechanistische Studien des wegeabhängigen Proteintransports ist.

Das AP1GBP1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des SYNRG-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des SYNRG-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von SYNRG nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die AP1GBP1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von SYNRG-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der AP1GBP1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf SYNRG-Exone abzielen, die für die AP1GBP1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere SYNRG-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom AP1GBP1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom AP1GBP1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des SYNRG-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das AP1GBP1 HDR-Plasmid (h) und AP1GBP1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von SYNRG-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten SYNRG-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.