Plasmide CRISPR d'Activation (h) AP-2β: sc-401846-ACT

TFAP2B code le facteur de transcription humain AP‑2β, un régulateur se liant à l’ADN de manière spécifique à la séquence, qui module des programmes d’expression génique contrôlant la différenciation cellulaire, la prolifération et l’organisation du développement. AP‑2β influence des réseaux transcriptionnels qui recoupent la signalisation des facteurs de croissance et des voies de spécification de lignée, façonnant des réponses dépendantes du contexte dans les tissus dérivés de la crête neurale et d’autres compartiments du développement. Une activité altérée de TFAP2B a été associée à des troubles congénitaux du développement et à des états transcriptionnels dérégulés pertinents pour la biologie du cancer, ce qui conforte son intérêt en tant que nœud d’étude des circuits aberrants de régulation génique. Les chercheurs étudient souvent AP‑2β afin de cartographier les gènes cibles en aval, de définir la logique enhancer‑promoteur et de comprendre comment le dosage d’un facteur de transcription influe sur les décisions de destin cellulaire.

AP-2β Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TFAP2B sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

AP-2β Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TFAP2B dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TFAP2B, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de AP-2β. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TFAP2B natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de AP-2β au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie AP-2β dans les cellules tumorales présentant une expression de TFAP2B silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.