Plásmido CRISPR de Activación (h) ANP32D: sc-410569-ACT

ANP32D (miembro D de la familia de fosfoproteínas nucleares ácidas ANP32) es una proteína nuclear humana de la familia ANP32, implicada en la regulación de la expresión génica asociada a la cromatina y en procesos relacionados con el ARN. Las proteínas ANP32 se caracterizan por repeticiones ricas en leucina y una región C-terminal ácida que puede influir en interacciones proteína–proteína implicadas en el control transcripcional, la dinámica nucleocitoplasmática y las respuestas al estrés celular. A través de estas funciones, ANP32D es relevante para vías que gobiernan la proliferación y la apoptosis, y se ha explorado su expresión alterada en contextos donde se encuentran perturbados programas epigenéticos y transcripcionales. El estudio de ANP32D ayuda a aclarar cómo las redes de fosfoproteínas nucleares moldean las transiciones de estado celular y los circuitos de regulación génica asociados a enfermedades.

ANP32D El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ANP32D sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ANP32D El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ANP32D en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ANP32D, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ANP32D. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ANP32D y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ANP32D en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ANP32D en células tumorales con expresión de ANP32D silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.