ANO4 Lentiviral Activation Particles (h2): sc-406887-LAC-2

Das humane ANO4 kodiert Anoctamin-4, ein Mitglied der TMEM16/Anoctamin-Familie von multipass-Membranproteinen, die mit calciumreguliertem Ionentransport und dem „Scrambling“ von Phospholipiden an zellulären Membranen in Verbindung gebracht werden. Die Aktivität von ANO4 steht mit der Regulation des Membranpotenzials, der intrazellulären Ca²⁺-abhängigen Signalübertragung sowie Umbauprozessen in Zusammenhang, die den vesikulären Transport, die Apoptose und die zelluläre Erregbarkeit beeinflussen. Eine veränderte Expression oder Funktionsstörung von TMEM16-Familienproteinen, einschließlich ANO4, wurde mit neurologischen und anderen komplexen Phänotypen assoziiert, was die Untersuchung seiner Rolle in Mechanismen der Neurodegeneration und der Gewebehomöostase unterstützt. Geneditierung von ANO4 sowie Studien zur funktionellen Perturbation ermöglichen die Aufklärung von Signalwegen in Modellsystemen, einschließlich elektrophysiologischer Untersuchungen und Lipid-Scrambling-Assays, um nachgeschaltete Signalnetzwerke sowie Genotyp-Phänotyp-Beziehungen zu kartieren.

ANO4 Lentivirale Aktivierungspartikel (h2) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente ANO4-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

ANO4 Lentivirale Aktivierungspartikel (h2) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der ANO4-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen ANO4-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen ANO4-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.