Annexin VII Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402823-ACT

ANXA7 codifica l’annessina VII, una proteina legante fosfolipidi dipendente da Ca2+ che si associa alle membrane cellulari e partecipa alla fusione di membrana, al traffico vescicolare e all’esocitosi regolata. L’annessina VII contribuisce alla dinamica della segnalazione del Ca2+ e all’organizzazione del citoscheletro, influenzando processi quali il rilascio dei granuli e la riparazione di membrana in tipi cellulari secretori ed eccitabili. Ruoli riportati collegano ANXA7 al controllo della crescita cellulare e alla segnalazione responsiva allo stress, e un’espressione alterata è stata osservata in molteplici contesti patologici, inclusi il cancro e i disturbi neurologici. Queste proprietà rendono ANXA7 un bersaglio utile per analizzare il rimodellamento di membrana regolato dal Ca2+ e le vie legate alla secrezione.

Annexin VII Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ANXA7 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Annexin VII Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ANXA7 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ANXA7, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Annexin VII. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ANXA7 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Annexin VII nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Annexin VII nelle cellule tumorali con espressione di ANXA7 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.