ANKRD13D Double Nickase Plasmid (h): sc-415493-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ANKRD13D Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ANKRD13D Double-Nickase-Plasmid (h) und ANKRD13D Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ANKRD13D abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ANKRD13D Double Nickase Plasmid (h) | sc-415493-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ANKRD13D Double Nickase Plasmid (h2) | sc-415493-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ANKRD13D kodiert ein Protein mit Ankyrin-Repeats, das an Protein-Protein-Interaktionen beteiligt ist, die den endozytischen Transport und die membranassoziierte Qualitätskontrolle koordinieren. Mitglieder der ANKRD13-Familie wurden mit ubiquitinabhängigen Sortierungsprozessen und der Regulation des Rezeptorumsatzes in Verbindung gebracht, was auf eine Rolle bei der Kopplung von Ubiquitinierungssignalen an vesikuläre Transportwege hindeutet. Über diese Prozesse ist ANKRD13D für Studien zur Proteostase, zur Endosomendynamik und zur Abschwächung von Signalwegen an der Plasmamembran relevant. Eine Fehlregulation des Traffickings und der ubiquitinvermittelten Sortierung ist häufig mit veränderter Wachstumsfaktor-Signalgebung und zellulären Stressantworten assoziiert, wodurch ANKRD13D ein geeigneter Ansatzpunkt für mechanistische Untersuchungen in krankheitsrelevanten Modellen ist.
ANKRD13D Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ANKRD13D-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ANKRD13D abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ANKRD13D-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ANKRD13D-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.