ANKRA CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-417372

Übersicht

ANKRA2 (Ankyrin-Repeat-Familie A, Mitglied 2) codiert ANKRA, ein Ankyrin-Repeat-enthaltendes Protein, dem eine unterstützende Rolle in Protein-Protein-Interaktionsnetzwerken zugeschrieben wird, die genregulatorische und Signalprozesse beeinflussen. Ankyrin-Repeat-Proteine sind häufig an der Assemblierung transkriptioneller oder chromatinassoziierter Komplexe beteiligt und können die Stabilität oder Lokalisation von Komponenten von Signalwegen modulieren. In humanen Zellen wird ANKRA2 im Kontext von Programmen der zellulären Homöostase untersucht, etwa Differenzierung und stressresponsive Regulation, bei denen scaffoldartige Faktoren dazu beitragen, die Signalwegaktivität fein abzustimmen. Eine veränderte Regulation von Ankyrin-Repeat-enthaltenden Proteinen wird allgemein mit dysregulierter transkriptioneller Kontrolle und krankheitsrelevanten Veränderungen des Zellzustands in Verbindung gebracht, was mechanistische Studien zur Funktion von ANKRA2 motiviert.

Das ANKRA CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des ANKRA2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des ANKRA2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von ANKRA2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ANKRA-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von ANKRA2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ANKRA-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf ANKRA2-Exone abzielen, die für die ANKRA-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere ANKRA2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ANKRA CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom ANKRA CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des ANKRA2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ANKRA HDR-Plasmid (h) und ANKRA HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von ANKRA2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten ANKRA2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.