ANKH Lentiviral Activation Particles (m): sc-419107-LAC

Mouse Ank kodiert ANKH, ein multipassiges Membranprotein, das den transmembranen Transport von anorganischem Pyrophosphat (PPi) reguliert und zur extrazellulären PPi-Homöostase beiträgt. Durch die Kontrolle des PPi/Phosphat-Gleichgewichts beeinflusst ANKH Mineralisierungsprozesse, die Funktion von Osteoblasten und Chondrozyten sowie calcifikationsbezogene Signalwege im Skelettgewebe. Eine Störung der ANKH-abhängigen PPi-Regulation ist mit pathologischen Verkalkungsphänotypen und Gelenkerkrankungen verknüpft, wodurch Ank einen nützlichen genetischen Ansatzpunkt für die Untersuchung von Signalwegen darstellt, die Knochenumbau, Knorpelerhalt und ektopische Mineralablagerungen in Mausmodellen steuern.

ANKH Lentivirale Aktivierungspartikel (m) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Ank-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

ANKH Lentivirale Aktivierungspartikel (m) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Ank-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen ANKH-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Ank-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.