Angiopoietin 2/Ang-2/ANGPT2 Double Nickase Plasmid (h): sc-400477-NIC

ANGPT2 kodiert Angiopoietin-2 (Ang-2), einen sezernierten Liganden für die endotheliale Rezeptor-Tyrosinkinase TEK/TIE2, der das vaskuläre Remodeling, die endotheliale Aktivierung und die Permeabilität moduliert. Im Gegensatz zur durch ANGPT1 vermittelten Stabilisierung wirkt Ang-2 häufig als kontextabhängiger Antagonist der TIE2-Signalgebung und sensibilisiert das Endothel für inflammatorische Zytokine sowie VEGF-getriebene angiogene Signale. ANGPT2 ist in PI3K–AKT-, MAPK- und NF-κB-assoziierte Programme eingebunden und beeinflusst dadurch Sprossung, Junction-Dynamik und Leukozytentransport. Eine dysregulierte ANGPT2-Expression ist häufig mit pathologischer Angiogenese und vaskulärer Entzündung assoziiert, wie sie in Tumoren, Retinopathien sowie kardio-metabolischen und entzündlichen Erkrankungen beobachtet werden, was ANGPT2 als mechanistischen Knotenpunkt in der vaskulärbiologischen Forschung stützt.

Angiopoietin 2/Ang-2/ANGPT2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ANGPT2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ANGPT2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ANGPT2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ANGPT2-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.