Angiopoietin 2/Ang-2/ANGPT2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400477-ACT

Das humane Gen **ANGPT2** kodiert Angiopoietin-2 (Ang-2), einen sezernierten vaskulären Wachstumsfaktor, der an die endotheliale Rezeptor-Tyrosinkinase **TEK/TIE2** bindet und die Angiopoietin–TIE-Signalübertragung moduliert. Ang-2 wirkt als kontextabhängiger Regulator des vaskulären Remodellings, der Endothelaktivierung und der Destabilisierung von Gefäßen und integriert Signale aus Hypoxie sowie proinflammatorischen Zytokinen, um die Barriereintegrität und den Leukozytentransport zu beeinflussen. Durch Crosstalk mit VEGF-getriebener Angiogenese und inflammatorischen Signalwegen trägt die **ANGPT2**-Expression zur Steuerung von Überleben und Migration von Endothelzellen sowie ihrer Interaktionen mit Perizyten bei. Eine Fehlregulation von **ANGPT2** ist mit pathologischer Angiogenese und vaskulärer Entzündung assoziiert, wie sie in Tumormikroumgebungen, Retinopathien und kardiometabolischen vaskulären Komplikationen beobachtet wird, und macht das Gen zu einem nützlichen Knotenpunkt für mechanistische Studien zur endothelialen Dysfunktion.

Angiopoietin 2/Ang-2/ANGPT2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ANGPT2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Angiopoietin 2/Ang-2/ANGPT2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ANGPT2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ANGPT2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Angiopoietin 2/Ang-2/ANGPT2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ANGPT2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Angiopoietin 2/Ang-2/ANGPT2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Angiopoietin 2/Ang-2/ANGPT2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ANGPT2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.