Angiopoietin 1/Ang-1/ANGPT1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-419041

Übersicht

Angiopoietin 1 (ANGPT1; Ang-1) ist ein sezernierter vaskulärer Wachstumsfaktor, der an die endotheliale Rezeptor-Tyrosinkinase TIE2/TEK bindet und dadurch die Gefäßreifung, das Überleben von Endothelzellen und die Stabilisierung der Barriere fördert. In Mausgeweben koordiniert die ANGPT1-Signalgebung die Rekrutierung von Perizyten, den Umbau der extrazellulären Matrix und Anti-Permeabilitätsreaktionen und wirkt damit destabilisierenden Signalen während des angiogenen Sprossens entgegen. Dieser Signalweg trägt zur Regulation der vaskulären Ruhe und des Traffickings entzündlicher Zellen bei, indem er die Integrität von Zell-Zell-Kontakten und endotheliale Aktivierungsprogramme moduliert. Eine Dysregulation der ANGPT1–TIE2-Signalgebung wurde mit pathologischer Angiogenese und Phänotypen vaskulärer Leckage in Verbindung gebracht, die für die Umgestaltung der Tumormikroumgebung, Modelle ischämischer Verletzungen und die Forschung zu entzündlichen Gefäßerkrankungen relevant sind.

Das Angiopoietin 1/Ang-1/ANGPT1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Angpt1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Angpt1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Angpt1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Angiopoietin 1/Ang-1/ANGPT1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Angpt1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Angiopoietin 1/Ang-1/ANGPT1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Angpt1-Exone abzielen, die für die Angiopoietin 1/Ang-1/ANGPT1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Angpt1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Angiopoietin 1/Ang-1/ANGPT1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Angiopoietin 1/Ang-1/ANGPT1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Angpt1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Angiopoietin 1/Ang-1/ANGPT1 HDR-Plasmid (m) und Angiopoietin 1/Ang-1/ANGPT1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Angpt1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Angpt1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.