AMPKγ2 Lentiviral Activation Particles (h): sc-404970-LAC

PRKAG2 kodiert die regulatorische γ2‑Untereinheit der AMP‑aktivierten Proteinkinase (AMPK), einem zentralen heterotrimeren Energiesensor, der zelluläre AMP/ADP:ATP‑Verhältnisse mit einer metabolischen Umprogrammierung koppelt. AMPKγ2 reguliert die Nukleotidbindung und die allosterische Kontrolle des katalytischen Komplexes und beeinflusst dadurch nachgeschaltete Signalwege, die Glukoseaufnahme, Fettsäureoxidation, mitochondriale Homöostase sowie die Unterdrückung anaboler Programme über Knotenpunkte wie mTORC1 und Autophagie koordinieren. In humanen Geweben ist PRKAG2 für energieintensive Physiologie besonders relevant und wurde mit kardialer Glykogenspeicherung und Reizleitungsstörungen in Verbindung gebracht, was seinen Einsatz in mechanistischen Studien zur Kopplung von Stoffwechsel und Elektrophysiologie stützt. Eine Beeinflussung der AMPKγ2‑Aktivität liefert zudem Erkenntnisse für Modelle der Stressanpassung, Nährstoffsignalgebung und Organellen‑Qualitätskontrolle in unterschiedlichen Zelltypen.

AMPKγ2 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente PRKAG2-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

AMPKγ2 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der PRKAG2-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen AMPKγ2-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen PRKAG2-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.